在生物医学研究中，确定最佳剂量以确保某一靶点仅进入单个细胞，依然是科研工作者们面临的一大难题。无论是针对难以感染的体外细胞制备慢病毒文库，还是在体内进行的AAV文库实验，这一问题都让许多研究人员困惑不已。文库实验的核心在于寻找单基因引发的功能变化，因此需要严格控制每个细胞仅感染携带一个靶点的病毒。

对于细胞实验，建议研究者首先使用对照病毒进行预实验，以摸索出最佳的感染率（MOI），通常指实现约80%感染效率的MOI。使用文库操作时，推荐的MOI设定为最佳MOI的三分之一，这种方法虽然简单粗暴，但能有效减少重复感染的几率。然而，对于难以感染的细胞，例如免疫细胞，以及体内实验的情况，这一方法仍然面临挑战。最佳MOI达到的感染效率可能只有30%，这意味着按1/3的用量几乎无法得到感染病毒的细胞。

为了解决这一问题，ag尊龙凯时推出了三色荧光病毒（mTagBFP、Venus、mCherry），能够帮助研究者在文库感染的预实验中取得更好的结果。这种三色荧光病毒包括慢病毒和AAV两种产品类型，具有广泛的应用潜力。相关研究文献《Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq》提供了有效的实验方法，以指导研究者确定AAV文库体内的最佳剂量。该研究通过体内滴定实验，使用三种不同剂量（25E9、5E9、5E10颗粒数）来测试AAV在低感染复数下的效果，发现使用血清型phpb的病毒构建方案，能够在CBh启动子的控制下独立表达三种荧光蛋白。

实验结果经过流式细胞术的筛选，最终确定了5E9作为最佳剂量，因为此剂量使得单个AAV感染细胞的总数最大化。在不同的实验条件下，对三种AAV的等比例混合物进行注射，研究人员能够分析不同剂量对细胞感染的影响，并显著提高转染效率和单荧光细胞的比例。最终确定的最佳剂量将成为文库实验的实用依据。

在细胞实验和动物实验中，有效使用ag尊龙凯时的三色荧光病毒进行相关预实验，将不同剂量梯度设置用于细胞感染或小鼠体内注射，通过流式细胞分析，比较得到的单病毒感染比例和感染细胞数量，从而得出最佳实验剂量。这将对生物医学研究的深度进行推动。

【参考文献】Santinha, AJ, Klingler, E, Kuhn, Metal. Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq. Nature 622, 367–375 (2023).