ag尊龙凯时提供的NCI-H1975人肺腺癌细胞培养指导文档旨在帮助用户有效培养和管理这些重要的细胞系。以下是细胞培养的关键步骤和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：NCI-H1975人肺腺癌细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：建议首次传代比例为1:2

备注：每两天更换培养基，可使用无菌离心管收集培养基以作过渡培养。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，待细胞生长良好时，应灌满完全培养液并密封瓶口以确保运输安全。处理步骤如下：

1. 用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后在超净台内进行无菌操作。
2. 将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。
3. 使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄成像留档，前三天的照片为重要依据。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集培养液，留下5ml完全培养基继续培养；若超过80%，可进行传代，具体步骤包括：

1. 丢弃培养上清液，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变化以终止消化。
3. 轻轻使细胞完全脱落后，转移至离心管中进行离心处理。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代，并补充新的完全培养基，放入37℃、5% CO2的培养箱中。

b. 细胞冻存

细胞达到80%汇合度后，您可以按照以下步骤进行冻存：

1. 用PBS清洗T25培养瓶中的细胞，随后添加胰蛋白酶消化液。
2. 观察细胞状态并加入完全培养液终止消化，同时转移至离心管中进行离心。
3. 去除上清液后，加入无血清冻存液，混匀并转移至冻存管中。
4. 冻存细胞直接放入-80℃冰箱，后续可转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速解冻后进行消毒处理。
2. 将细胞转移至含培养基的离心管中，离心后重悬。
3. 接种至培养瓶中，放入细胞培养箱继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞因不牢固可能发生脱落，需及时进行离心收集。处理后的细胞，应再进行相应的重新培养以进行对比。

五、售后条款

1）重发的情况

• 运输中细胞丢失或瓶身破损。
• 收到后的48小时内报告细胞污染。
• 细胞复苏后活性不佳需提供照片。
• 出现污染需要提供相关照片和操作记录。

2）不予重发的情况

• 细胞受到用户不当处理导致的污染。
• 使用非推荐培养体系导致的不良状态。
• 没有提供培养前3天照片或未及时报告问题。

选择ag尊龙凯时的细胞培养体系，您将体验到高品质的细胞资源和专业的技术支持，确保实验顺利进行。