AG尊龙凯时的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南主要包括细胞培养条件和操作程序，以下是详细说明。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁、悬浮混合生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）进行冻存

培养体系：F12K培养基 + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代，2天后换液。

备注：悬浮细胞需离心收集，而贴壁细胞应采用贴壁处理方式，将培养基收集至无菌离心管中，保留用作过渡培养。

二、细胞处理及运输

收到细胞后，待细胞状态良好后，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳的运输方式。在使用75%酒精喷洒消毒后，放置于超净台内进行无菌处理。随后将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中，静置3-4小时以便细胞恢复稳定状态。显微镜下观察细胞生长情况，并保留不同倍数的拍照数据（最好40x、100x和200x各一张）作为重要的售后依据。若未提供照片，默认收到状态良好。传代时，建议保留一瓶用原完全培养基，其余用自配的完全培养基，以便进行对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当贴壁细胞汇合度未超过80%时，收集培养液于离心管中，保留5ml培养基并放置于孵箱中。如果细胞密度超过80%，进行传代培养。具体方法包括：

1. 对贴壁细胞：
   1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS液洗涤细胞1-2次。
   2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞圆形并脱落，结束消化，加入5ml培养基终止反应。
   3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
   4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
2. 对悬浮细胞：
   1. 收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后轻轻混匀，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml完全培养基的新瓶中。
   2. 或选择半数换液，弃去一半培养基，保持剩余细胞懸浮状态，并按1:2比例分瓶。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗一次。接着添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化。重悬后离心，将沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中，最后将冻存细胞放置于-80℃冰箱中保存，必要时可转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，待无结晶后用75%酒精擦拭外壁。将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液后重悬并接种至T25培养瓶中，在37℃、5% CO2环境下继续培养，第二天更换新鲜培养基。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会有部分脱落，属于正常现象。如果脱落较多，可收集培养液于离心管内，再进行离心处理。同时需按照先前提到的方法进行重悬和传代。

五、售后策略

1. 可重发情况

如遇细胞运输问题、污染、活性问题等，需在规定时间内提供实验结果及照片以便确认。对于合理核实后的重发请求，我们会积极处理，确保客户满意。

2. 不予重发情况

若因客户操作不当、细胞受污染或未提供必要证据等原因，将不予重发，具体情况将依照实际处理。

为确保客户获得最佳细胞培养体验，选择AG尊龙凯时作为您的细胞来源，我们将竭诚为您提供支持与服务。